Protocolos
Echa un vistazo a nuestro JoVE detallado protocolo y video guía adjunto para la edición del genoma con CRISPR-Cas9 RNP en células T y HSPC humanas primarias, Caenorhabditis elegans y Parhyale hawaiensis.
Los protocolos adicionales para una variedad de técnicas relacionadas con la edición de genes CRISPR-Cas9 están disponibles de forma gratuita en protocolos.io. Explore los protocolos generados por IGIque incluyen:
- Expresión y purificación de la proteína Cas9
- In vitro transcripción de ARN guía
- Nucleofección Cas9 RNP
- Extracción de ADN genómico y PCR
- Re-amplificación de bibliotecas CRISPRi y CRISPRa
Protocolos utilizados por nuestro Instalación de cribado CRISPR puede ser encontrado aquíque incluyen:
- Clonación, secuenciación y reamplificación de bibliotecas de gRNA
- Generando líneas celulares estables que expresan Cas9
- Producción y transfección de lentivirus a gran escala
- Detección de células adherentes y en suspensión
También hay disponibles colecciones más grandes de protocolos:
CRISPR-Cas: un manual de laboratorio. Editado por Doudna JA y Mali P. Prensa de laboratorio Cold Spring Harbor (2016).
Contiene una variedad de protocolos para la manipulación del genoma con Cas9, incluida la edición del genoma, la resolución de problemas en organismos específicos, cómo detectar la edición, guiar la construcción de la biblioteca de ARN y la detección de inhibición o activación de CRISPR.
Métodos y protocolos CRISPR. Editado por Lundgren M, Charpentier E y Fineran PC. Métodos en biología molecular (2015).
Presenta protocolos para estudiar los mecanismos de inmunidad CRISPR-Cas desde perspectivas genéticas, genómicas, moleculares, bioquímicas y estructurales.
Edición del genoma en animales. Editado por Hatada I. Métodos en biología molecular (2017).
Abarca métodos para editar genomas de muchos animales diferentes, incluidos insectos, peces y mamíferos.