Un nuevo artículo del laboratorio de Doudna sobre la ingeniería de mejores proteínas Cas
En un nuevo documento in Celular, los coautores Amy Eggers, Kai Chen y sus colegas del laboratorio de Doudna lograron avances en la ingeniería racional de Proteínas Cas proteínas para aumentar la eficiencia de edición. Sus experimentos se centraron en iGeoCas9, una proteína Cas del Geobacillus stearothermophilus bacteria que fue desarrollado en el laboratorio para una mayor eficiencia de edición. iGeoCas9 edita 100 veces más células en experimentos de laboratorio que los convencionales Cas9 – pero ¿qué lo hace mucho más eficiente?
A través de cuidadosos experimentos, el equipo descubrió tres claves mutaciones en una porción de la proteína Cas conocida como dominio WED. Estas mutaciones parecen aumentar el contacto entre el dominio WED y el objetivo. letra singular, aumentando la velocidad a la que se desenrolla la doble hélice del ADN, lo que finalmente permite que la proteína Cas corte el ADN. Estos cambios también amplían la gama de áreas de una genoma, que se puede abordar reduciendo la necesidad de una coincidencia exacta entre el lugar donde se CRISPR El complejo se une al ADN, conocido como PAM secuencia, y el un ARN guía secuencia.
Eggers, Chen y el equipo crearon mutaciones similares en una proteína relacionada, Nme2Cas9, con la intención de aumentar el contacto entre el dominio WED y el ADN objetivo, lo que resultó en aumentos dramáticos similares en la eficiencia de edición; en otras palabras, utilizando ingeniería racional para mejorar una Proteína Cas. Los dominios WED están presentes en Cas9, Cas12, así como otras proteínas relacionadas.
"Los científicos han utilizado estrategias de ingeniería mediante escaneo mutacional intensivo para mejorar los editores del genoma, lo que puede requerir mucho tiempo y recursos", dice Eggers. “Ahora podemos diseñar fácilmente mutaciones beneficiosas, agilizando el proceso para crear mejores editores de genoma. Lo demostramos creando iNme2Cas9, un editor de genoma diseñado racionalmente con una actividad sustancialmente mejorada. Diseñar el dominio WED es un método sencillo para simplificar y avanzar edición del genoma."
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