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Seminario de Paula Cannon: Optimización de los resultados de reparación dirigidos por homología en la edición del genoma
Un enfoque común en edición del genoma basado en CRISPR es utilizar reparación dirigida por homología (HDR) of ADN descansos creados por objetivo nucleasas, Tales como CRISPR-Cas9, para dirigir sustituciones genéticas precisas o inserciones específicas de sitio. Los métodos para optimizar la frecuencia de tales resultados de HDR a menudo comienzan seleccionando una nucleasa objetivo con alta actividad, medida por la frecuencia de indel formación en ausencia de la plantilla de homología de ADN. En cambio, mostraré que elegir CRISPR ARNs guía con un perfil indel específico puede identificar el subconjunto de guía ARNs guía que tienen más probabilidades de dar resultados óptimos de HDR. Además, este enfoque se puede combinar con programas de predicción indel para aumentar la posibilidad de identificar un ARN guía óptimo sin la necesidad de seleccionar múltiples combinaciones de donantes de homología y complejos CRISPR-Cas9 emparejados. Esto es especialmente útil para aplicaciones en hematopoyéticos primarios. células, donde las plantillas de homología se basan a menudo en AAV vectores que son costosos de producir, o para aplicaciones donde la proporción de HDR a NHEJ, por sus siglas en inglés los resultados son una consideración importante.
Optimización de los resultados de reparación dirigidos por homología en la edición del genoma
Profesor distinguido, Departamento de Microbiología e Inmunología Molecular
Universidad del Sur de California
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